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I DONACIÓN DE SANGRE, PARA LA INVESTIGACIÓN DE LOS CAVERNOMAS EN ESPAÑA

La semana pasada me desplacé a Madrid, para acudir al laboratorio de Investigaciones Biológicas del CSIC, donde había quedado con la Dra. Luisa Mª Botella, una de las doctoras del equipo de profesionales que colabora con nosotros.

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Natalia Isabel Gómez junto a la Dra. Luisa María Botella Cubells, el Dr. Ángel Cuesta y el resto del equipo del laboratorio del Centro de Investigaciones Biológicas del CSIC

Teníamos que tratar varios temas, entre ellos:

  • ORGANIZACIÓN DE PROYECTOS:

Hablamos sobre algunos de los proyectos que estamos desarrollando desde nuestra asociación. Los estuvimos analizando para encauzarlos y gestionarlos adecuadamente.

Gracias Luisa por todo, me ayudaste a comprender muchas de las cuestiones que surgen en éste camino, necesarias de resolver para poder organizar la variedad de trabajos que tenemos por delante.

  • DONACIÓN DE SANGRE PARA LA INVESTIGACIÓN DE FCCM:

Me ofrecí como donante, para realizar la primera extracción de sangre periférica (50ml) con la que se intentará conseguir un cultivo de células endoteliales o vasculares, representativas de la cavernomatosis. No sabemos si se van a poder obtener o no, pero es un primer paso para poder comenzar con algunos de los proyectos de investigación que sugiere ésta enfermedad.


Los cultivos a partir de precursores endoteliales representativos de una enfermedad, se hacen en muy pocos sitios.

ES LA PRIMERA VEZ QUE SE INTENTA CONSEGUIR UN CULTIVO DE CÉLULAS ENDOTELIALES EN PACIENTES DE CAVERNOMAS EN ESPAÑA.

En la población que no tiene ninguna enfermedad reconocida, el éxito de que se pueda obtener un cultivo primario de células endoteliales es de un 50%. En determinadas enfermedades vasculares en las que parece que hay más movilización de precursores endoteliales que circulan desde la medula ósea, pasan al torrente sanguíneo y circulan por la sangre periférica, parece que hay más movilización y mayor número de precursores por tanto la probabilidad de éxito es mayor.

Así es que, vamos a cruzar los dedos para que se puedan conseguir unos pocos de éstos precursores, poder cultivarlos en las condiciones adecuadas (con un medio que lleve colágeno) para que se sientan a gusto, se puedan dividir y seguir con el procesado posterior.

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7 de los viales extraídos a Natalia, en su primer proceso

Distinguir la fracción que tiene núcleo, de la fracción que no lo tiene en la sangre. Estos son los glóbulos rojos que son el componente mayoritario, se centrifuga durante 40 min y así la sangre se puede separar en tres partes. La más superior va a ser el plasma sanguíneo, que también lo cogemos porque es importante en posibles biomarcadores relacionados con una patología. Luego cogemos la fracción de células, es como un alo blanco que contienen todos los tipos distintos de leucocitos, monicitos, las plaquetas y entre esos esperemos que estén localizados los posibles precursores endoteliales.

Todo esto seria el P0 o Paso Cero, a ver si podemos llegar al P2 o Paso Dos, para enviar al Dr. Juan Zaldive y la Dra. Celia Pombo (el equipo de investigadores que trabaja en la Universidad de Santiago de Compostela y también forman parte del equipo de profesionales que están colaborando con nosotros) 2 viales, con 2 millones de células para que puedan seguir con las investigaciones que están realizando sobre los cavernomas.

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7º día de cultivo de sus células

Si conseguimos llegar a éste paso, se van a precisar más donantes para tener cultivos representativos de pacientes con FCCM. Uno de los problemas de la investigación, es el número de personas para hacer estudios. Si quieres colaborar en la investigación de los cavernomas, ponte en contacto con nosotros. Necesitamos donantes de los tres genes implicados en FCCM.

Muchas gracias a la Dra. Luisa Mª Botella, al Dr. Ángel Cuesta y a todo el equipo por vuestra cercanía, empatia y afinidad. Fue un día fabuloso y me vine con muchas energías positivas, tanto por vuestra forma de ser, como por el trabajo que estáis realizando con la investigación de enfermedades raras.

Natalia I.G.


II DONACIÓN DE SANGRE

Laura y Natalia pasaron por Madrid el 19 de Septiembre del 2019, antes de ir a Burgos donde participaban en la X Escuela de Formación organizada por Feder/Creer, porque habían quedado con la Dra. Luisa Mª Botella y su equipo en volver a donar sangre, para la investigación de los cavernomas.

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Laura Aguiñiga, en la II donación de sangre, para la investigación de los cavernomas

 

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El Dr. Ángel Cuesta, Laura Aguiñiga, Natalia Isabel, la Dra. Luisa María Botella Cubells y el resto del equipo en el laboratorio del Centro de Investigaciones Biológicas del CSIC

III DONACIÓN DE SANGRE

El 16/10/2019, Patri y Laura volvieron a donar sangre, para la investigación de los cavernomas.

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Patri Aguiñiga, en la III donación de sangre, para la investigación de los cavernomas

IV DONACIÓN DE SANGRE

El 22/11/2019, nuestro compañero Miguel Angel Checa, también participó en la donación de sangre para la investigación de los cavernomas.

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Miguel Angel Checa, en la IV donación de sangre, para la investigación de los cavernomas

Y POR FIN LLEGO LA GRAN NOTICIA TAN ESPERADA POR TODOS

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«Afortunadamente, podemos decir que al final, hemos conseguido que aparezcan las células endoteliales maduras, ya diferenciadas a partir de los precursores endoteliales. Aparecen en grupos, que se dividen, hasta cubrir todo el espacio de colágeno, donde fueron cultivadas. La confluencia total, cuando ya no queda ningún espacio vació en la placa, obliga a levantar a las células pegadas al colágeno del fondo de la placa. Se levantan usando un enzima, la tripsina, que rompe las uniones entre las células y el colágeno del fondo. Las células flotan, tras un par de minutos en contacto con una solución de tripsina diluída. Entonces se recogen añadiendo más medio de cultivo y se centrifugan. El sedimento recogido (pellet) en el fondo del tubo, se resuspende en medio fresco de cultivo y se vuelve a plaquear (sembrar) en un frasco de 25 ml de volumen. Este sería el P1 (pase 1). Entre 3-5 horas las células, ahora en pase 1 P1, se pegan en el fondo de la botella. A los 4 días, tenemos el fondo de la botella de 25 ml (F-25) todo lleno de células endoteliales (BOECs) de cavernoma CCM1 (porque la donante era portadora de la mutación en CCM1), tendremos aproximadamente entre medio millón y un millón de células. Las volvemos a levantar con la solución de tripsina, y esta vez, tras centrifugación, el pellet lo resuspendemos en 5 ml de medio de cultivo, y ponemos 1 ml, por cada nuevo frasco de 25 ml (F-25), de modo que tendremos 5 frascos de F25 con colágeno, donde van a crecer ahora las células que estarán en Pase 2, P2. Tras un fin de semana de división, el lunes ya están llenos a confluencia los frascos de F25 en pase 2. En este momento, levantamos las células de cada frasco,  congelamos el sedimento o pellet de cada frasco que corresponde a 0.5-1 millón de BOECs. Ahora, lo resuspendemos en 1 ml de suero fetal bovino con 10% de DMSO. Y en ese medio se congelan en tubitos (viales) a -80ºC.

Para seguir los experimentos, enviaremos 2 viales al laboratorio del Cimus, de los Drs Juan Zalvide y Celia Pombo en Santiago de Compostela.»_Dra. Luisa Botella


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